我的PCR条带弥散,阴性对照也弥散,但是不加引物不弥散,当然也没有条带,请问都是什么原因啊?

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/04/30 04:34:25
我的PCR条带弥散,阴性对照也弥散,但是不加引物不弥散,当然也没有条带,请问都是什么原因啊?

我的PCR条带弥散,阴性对照也弥散,但是不加引物不弥散,当然也没有条带,请问都是什么原因啊?
我的PCR条带弥散,阴性对照也弥散,但是不加引物不弥散,当然也没有条带,请问都是什么原因啊?

我的PCR条带弥散,阴性对照也弥散,但是不加引物不弥散,当然也没有条带,请问都是什么原因啊?
阴性对照的作用就是来判断实验是否有污染的,如果PCR条带和阴性对照都弥散的话,原因应该是污染.污染一般有试剂的污染,也有可能是环境的污染.
先说试剂的污染.你设置的阴性对照所用的每一种试剂都存在被污染的可能,最实际也最麻烦的方法就是,每次更换一种试剂,重复实验,从而确定那种试剂发生污染.你提到的不加引物不弥散,那是必然的结果,及时所有试剂都发生了污染,不加入引物,扩增也是没办法进行的,结果也不会有条带.
再说环境的污染.环境的污染一般就是指气溶胶的污染,PCR实验室多少都会存在这种问题,气溶胶是比较难以消除的.先假设你所用的试剂都是正常的,你可以选择两到三对PCR产物片段较长的引物做试验(比你此次出问题的实验所选的要长),进行正常PCR,电泳看结果是如何,如果不出现弥散现象,可初步判断为气溶胶污染.接着选两到三对产物片段较短的做实验(同上),观察结果,如果同样出现弥散现象,此时可断定确实是气溶胶污染.
以上所说,属于理想状态,首先要排除个人操作失误,另外具体的情况再具体分析!
个人理解,

是跑出的条带很糊么?如果是的话,按照你说的阴性对照也弥散应该是引物的问题,也有可能是PCR试剂的问题,还有可能是退火温度的问题。逐个排除吧。

降低电压 跑慢点

引物有无污染,跑个电泳看看

我的PCR条带弥散,阴性对照也弥散,但是不加引物不弥散,当然也没有条带,请问都是什么原因啊? 如何消除PCR的拖尾PCR扩增出来有目的条带,但是有拖尾,呈弥散片 PCR结果没有条带,都是弥散的,这是为什么前几次做的结果都挺好的,条带很清楚,亮度也可以,就是不太齐,但是最近几次几乎没有目的带,都是弥散的,从头到尾,我用的东西都是一样的,条件也没变 您好.我最近的PCR扩的产物成弥散状,但是能看见目的条带,这是怎么回事啊,我之前试条件时都没有弥散这样的产物酶切能切吗? PCR跑出来的条带比较弥散,主要有哪些原因啊? 我最近做PCR,目的条带是321bp,但是我扩出来的阴性对照都有条带,而且和样本条带扩出来的一样我级别太低,没办法上传图片,我用的是PCR Master Mix,两种不同厂家的做出来的阴性对照都有条带 请问若因为非特异扩增导致PCR产物弥散,理论上弥散带里是否应该包含目的条带?谢谢TT-TTPCR产物电泳弥散,因为退火温度为55,所以初步考虑是退火过低导致的非特异扩增.但小女子有一疑问,我的 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后出现很多弥散的条带是PCR的原因还是电泳的原因呢? 二次PCR的产物电泳图观察,所有样都不出现条带,而是弥散状的,从投拖到尾, PCR出现大分量弥散条带?电泳RNA时无DNA条带.可能是什么原因? 电泳中弥散条带是什么意思? PCR结果呈弥散状是什么原因造成的我上个星期跑完PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳时,所有样都不出现条带,而是弥散状的,从投拖到尾,而maker却是好的,说明不是电泳的问题,我把所有的酶,buffer,Mg+都 肝脏组织中atf2 基因cDNA的PCR程序快纠结死我了,我用以下程序跑电泳出来的结果几乎总是弥散,看不到目的条带.F:CCGAGATCTatgagtgatgacaaaccctttctat 有BGI2 酶切位点G:CCGGTTAACtcaacttcctgagggctgtg 有HPA1 酶切位 请问你做PCR之后出现弥散的带,现在解决了吗,怎么解决的?我用cDNA做模板,也出现这种情况. 全基因组DNA双酶切,没有弥散条带或者条带异常全基因组DNA双酶切(HpaⅡ和EcoRⅠ、MspⅠ和EcoRⅠ,110V琼脂糖电泳没有弥散条带,加大DNA的量酶切后,条带异常和从前不同.酶切产物连接完,做PCR扩增 弥散的近义词 弥散的近义词是什么 弥散强化的定义?