革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌有什么区别革兰氏阴性菌在环境污染中有什么作用?革兰氏阳性菌又有什么作用?

革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌有什么区别革兰氏阴性菌在环境污染中有什么作用?革兰氏阳性菌又有什么作用?
革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌有什么区别
革兰氏阴性菌在环境污染中有什么作用?
革兰氏阳性菌又有什么作用?

革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌有什么区别革兰氏阴性菌在环境污染中有什么作用?革兰氏阳性菌又有什么作用?
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,1884年由丹麦医师Gram创立
细菌先经碱性染料结晶染色,而经碘液媒染后,用酒精脱色,在一定条件下有的细菌此色不被脱去,有的可被脱去,因此可把细菌分为两大类,前者叫做革兰氏阳性菌（G+）,后者为革兰氏阴性菌（G—）.为观察方便,脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染.阳性菌仍带紫色,阴性菌则被染上红色.有芽胞的杆菌和绝大多数和球菌,以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌,螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应.
[原理]：革兰氏染色目前有三种观点：等电点学说、化学学说和渗透学说.
1． 等电点学说,革兰氏阳性菌的等电点在PH2-3,比阴性菌（PH4-5）低,加之碘为弱氧化剂,可降低革兰氏阳性菌的等电点,致使两类菌的等电点差异扩大,因此阳性菌和碱性染料的结合力比阴性菌更强.
2．化学学说,碘液在菌体内与结晶紫结合后又和菌体内核糖核酸镁盐-蛋白质复合物结合,此结合物不易被丙酮酒精脱掉,呈革兰氏染色阳性.因革兰氏阴性菌缺乏核糖核酸镁盐,故对碘与结晶紫结合物摄取少,且不牢固,易被丙酮酒精脱色而呈革兰氏染色阴性.
3．渗透学说,乙醇使阳性菌所含粘肽多糖脱水而致细胞壁间隙缩小,通透性降低,在菌体内保留了染料-碘复合物,呈紫色.阴性菌含粘肽少,细胞壁变化不大,通透性不受影响,菌体内的染料-碘复合物较易透出,失去紫色,被复染成为红色.
[试剂]：Crystal violet(结晶紫)、Gram Iodine(碘液)、Decolourizer（丙酮酒精）、Safranin（稀释沙黄）
[操作]：
1．标本处理：（1）.有菌部位的标本,如痰液、粪便、各种拭子、创面等可直接涂片.
（2）.无菌部位的标本,如脑脊液、胸水、腹水、胆汁、尿液、关节液等,应取适量标本（最高可达5-7ml）,经3000rpm 离心10min.,取沉渣涂片染色.
2．涂片制作：菌液涂片时,用接种环沾取菌液点在载玻片上,标本可直接在玻片上涂布；菌落涂片时,先取生理盐水一滴,置玻片上,用接种针挑取菌落在盐水中涂布.制作的涂片应自然干燥,并经火焰固定,固定的温度不宜过高,以玻片背面接触手背不烫为准,否则可能使细菌形态改变.将固定后的涂片进行染色.
3． 染色方法：
（1）.加上Crystal violet(结晶紫)后,染色3-5秒或更久,之后用自来水冲洗之.
（2）.加上Gram Iodine(碘液)后染色3-5秒或更久,之后用自来水冲洗之.
（3）.以Decolourizer（丙酮酒精）脱色约5-10秒,并用自来水冲洗之.
（4）.加上Safranin（稀释沙黄）后,染色3-5秒或更久,之后用自来水冲洗之.
（5）.吸干或在空气中凉干后,置油镜镜检.
4．结果观察：紫色为革兰氏阳性,红色为革兰氏阴性.
[报告方式]：革兰氏染色：检出革兰氏阳性球菌 ；革兰氏阴性球菌
检出革兰氏阳性杆菌 ；革兰氏阴性杆菌
[注意事项]：
1．标本涂片不能太厚,严格按操作要求进行.
2．玻片通过火焰温度不能太高.
3．若涂片较厚,应延长脱色时间,直至不在出现紫色为止.
[临床意义]：通过革兰氏染色,将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性,便于临床治疗.
[附]
1 沙黄（番红）Safranine T [C20H19ClN4=350.85]
红棕色粉末；碱基性染料.在水中溶解,在乙醇中易溶.
2 碘液配制：0.01mol/l碘液——称取1.3g碘,置于50mol烧杯中,加入2.5g碘化钾及25毫升蒸馏水,不断搅拌之,使其溶解均匀.再加0.2mol浓盐酸(体积质量1.19g/cm3),再加蒸馏水稀释到1000mol.溶液应贮藏在棕色试剂瓶中,储于低温暗橱内.有效期为一个月左右
革兰氏阴性菌,以[大肠杆菌]为代表.大肠杆菌为兼气性菌种,一般生存於肠道中及厌氧的还境中.革兰氏阴性菌细胞壁的特徵为有一层out member 与阳性菌种不同.目前对大肠杆菌的研究很多,除了它是一般食物中是否有被污染的指标外,很多分子生物学方面的研究皆需要使用到大肠杆菌当作实验宿主