ISSR－PCR退火温度如何设定有些引物说明书上的Tm值只有30～40度,通过公式2（A＋T）＋4（G＋C）－2计算的温度也只有30多度,我该如何设定退火温度?

ISSR－PCR退火温度如何设定有些引物说明书上的Tm值只有30～40度,通过公式2（A＋T）＋4（G＋C）－2计算的温度也只有30多度,我该如何设定退火温度? ISSR-PCR引物的退火温度问题我做ISSR-PCR引物的退火温度能不能直接使用primer5.0这个软件计算得出的退火温度.理论上来说这是最佳的退火温度吗? ISSR-PCR的退火温度怎么设计? 为什么做PCR设定引物退火温度时设定的退火温度要比合成引物得到的引物Tm值低几度? PCR的退火温度怎么设定 RT-PCR,自己前后引物Tm差7度,前引物63度,后引物58度,退火温度如何设置? 求助巢式PCR退火温度的设定我最近准备做巢式PCR,下游引物用oligo dT,上游用两个基因特异性引物,但上游的两个引物和下游的oligo dT相比,Tm值差了将近10度,这样退火温度怎么设定呢? 如何优化pcr反应中的退火温度 如何优化PCR反应中退火温度 做ISSR 的PCR条件优化我想根据这几个做个正交试验 模板浓度,dNTP,引物浓度,taq酶,Mg离子浓度是不是太多了……?退火温度我用梯度PCR基本弄好了,总体积25μl,模板1μl,引物1μl,其它用的是mix跑的, 上下游引物退火温度分别为47、49℃,如何设置温度梯度PCR最合适引物退火温度低（上下游分别为47、49）,P不出目的条带 请问PCR引物浓度是如何设定的? 请问PCR引物浓度是如何设定的? ISSR问题,万分感激!这个是成分分别加的,应该没有问题,之前做普通PCR都是这样的.今天我又换MIX,只加模板和引物,用五个退火温度还是一样,换了其他两种引物还是一片亮带,没有单一条带.这个 知道引物如何求退火温度和循环次数 如何进行引物退火温度的梯度设置 引物退火温度是53度,如何设置两个梯度的退火温度 PCR过程中引物的碱基数量与种类 和 退火温度有什么关系?理由