紫外分光光度仪测量叶绿素时吸光度的范围?或者一般的吸光度在多大范围是正确的?急,

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/02 17:17:59
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紫外分光光度仪测量叶绿素时吸光度的范围?
或者一般的吸光度在多大范围是正确的?急,

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叶绿素a无法使用校准曲线,需用几个波长下的吸光度值,根据经验公式来分别计算出各项指标的含量.因为叶绿体色素由叶绿素a、叶绿素b等物质组成,试液是多组分的混合溶液,在试液中分离这几类物质的难度较大,且无必要.叶绿素a在645nm和663nm 处均有吸收,在645nm处吸光系数较小,为16.75,在663nm 处较大,为82.04；叶绿素b 在645nm和663nm 处亦都有吸收,但在645nm处吸光系数较大,为45.60,在663nm 处较小,为9.27.由此可知：叶绿素a的吸收峰值出现在663nm 处,该吸收曲线延伸到645nm处,在此波长处的吸收系数不如在663 nm 处大,因此在计算公式中求算叶绿素a的含量时,需扣除叶绿素b在663nm和645nm 处的吸光度值,再进行计算.
标准分析方法要求,叶绿体色素提取液不可浑浊,在710nm或750nm波长下测量吸光度,其值应小于叶绿素a吸收峰的吸光度值的5％,否则应重新过滤.假定样品在663nm处的吸光度值为0.03,则在750nm处的吸光度值不得大于0.0015,对试液的清澈程度要求很高,测量710nm或750nm的目的是避免悬浮物质的干扰,一般测量水中的浑浊度所采用的波长为680nm,为避免在680nm处仍有叶绿素a产生的吸收值,故将测量浑浊度的波长选在710nm以上.在计算公式中,凡参与计算的各吸光度值都应减去710nm处的吸光度值,以扣除悬浮物质的干扰.

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