PCR技术只是对已有基因进行扩增,又怎么算是获取目的基因的方法?

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/05/04 16:41:49

PCR技术只是对已有基因进行扩增,又怎么算是获取目的基因的方法?
PCR技术只是对已有基因进行扩增,又怎么算是获取目的基因的方法?

PCR技术只是对已有基因进行扩增,又怎么算是获取目的基因的方法?
PCR技术是DNA扩增技术,它能在比较短的时间内产生大量的DNA.在获取目的基因后才使用PCR技术.
获得目的基因的方法：
一、构建基因文库
提取总DNA.
用限制性内切酶将总DNA切成小片段,连到质粒或噬菌体载体上,把这些质粒转化到细菌,随着细菌繁殖而复制,这个过程又称为基因克隆（gene clone）
将总DNA包含的基因组各片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上,便构成了该生物的基因文库（gene library）.
二、反转录人工合成互补DNA
细胞核中转录的mRNA,已经加工去除内含子,只有外显子（编码蛋白质的序列）,比构建基因文库优越,因此,先从细胞中提取所需的mRNA.
以mRNA为模板,在逆转录酶的作用下,合成互补的DNA片段(complementary DNA,cDNA),在逆转录完成时,mRNA被降解.在大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段的作用下,再以第一条DNA为模板,合成另一条互补DNA链.
优点在细胞分化各阶段细胞往往转录出特异的编码特殊蛋白质的mRNA.因此,用cDNA方法获取的DNA片段往往是具有特定功能的目的基因.

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