用氯化钙法将质粒DNA转入大肠杆菌实验中,转化成功的关键有哪些?

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/06 15:38:39
用氯化钙法将质粒DNA转入大肠杆菌实验中,转化成功的关键有哪些?

用氯化钙法将质粒DNA转入大肠杆菌实验中,转化成功的关键有哪些?
用氯化钙法将质粒DNA转入大肠杆菌实验中,转化成功的关键有哪些?

用氯化钙法将质粒DNA转入大肠杆菌实验中,转化成功的关键有哪些?
影响转化效率的因素很多,主要有:感受态细胞制备的质量、受体菌生长期(大肠杆菌在对数生长期易产生感受态)、质粒的大小和构型、所用试剂的纯度、接种前菌种的保藏方式、冰浴时间(延长冰浴时间可略微提高转化率)、器皿的清洁度、化合物及无机离子(Rb+、Mn+、二甲基亚砜能适当提高转化率)、质粒与细胞个数的比例(质粒与细胞个数比例在1:1以下时,转化率随着加入DNA的量增加而呈线性增加).
注意事项:
(1)细胞生长状态和密度.密度不足或过高会使转化率下降.
(2)质粒DNA的质量和浓度.用于转化的质粒DNA应主要是共价闭环DNA.转化率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比,量过多货体积过大时,转化率下降.
(3)试剂的质量.
(4)防止杂菌和其他外源DNA的污染.
(5)根据所需质粒DNA的特性,设置相应的选择性培养基进行筛选,有的可能还需进行多补筛选.

用氯化钙法将质粒DNA转入大肠杆菌实验中,转化成功的关键有哪些? 用氯化钙法将质粒DNA转化入大肠杆菌实验中,转化成功的关键因素有哪些? 将重组质粒导入大肠杆菌,先用氯化钙溶液处理大肠杆菌和细胞壁有关?为什么 “将重组质粒导入大肠杆菌,先用氯化钙溶液处理大肠杆菌” 为什么这与细胞壁有关 将大肠杆菌的质粒转入动物细胞,其抗性基因是否就在宿主中表现出来 大肠杆菌DH5α有质粒吗我们做了SDS裂解法提取大肠杆菌DH5α中的基因组DNA的实验,我想问一下,这个菌株中没有质粒DNA的干扰吗? 转入大肠杆菌质粒还可以提取转入农杆菌?为什么? 农杆菌转化法中,转入受体细胞的是Ti质粒,还是质粒上的T-DNA?如果是T-DNA,那么这个DNA如何从质粒中断裂出来? 十万火急!用PCR法检测人胰岛素基因是否转入大肠杆菌实验报告 从大肠杆菌中分离出来的质粒,经过Dna重组后,只能导入大肠杆菌中么? 大肠杆菌质粒的提取创始人实验报告用, 有人尝试将干扰素基因与大肠杆菌的质粒重组,转入大肠杆菌体内后,形成工程菌,此操作能制备到干扰素吗? 大肠杆菌转化后长得很慢,提质粒跑电泳条带很淡我是用的一种基因缺陷性大肠杆菌做感受态,然后将连接好的质粒转入(连好的质粒里含有缺少的基因片段),涂平板以后需要24h才有菌落长出,挑 大肠杆菌质粒成分是DNA还是RNA? 转入质粒后种植在LB平板上的大肠杆菌怎样在-70--80度时保存,最好是用甘油.偶是新手,刚做实验,谢啦. 1、如何以大肠杆菌的质粒DNA为载体克隆一个编码动物的技术的基并使之在大肠杆菌中表达2、简要说明实验中可能遇到的问题及解决办 从大肠杆菌中提取的质粒DNA存在的3中形式 设计一个实验流程,把下面的目标基因重组转化到大肠杆菌中进行表达要求包括:质粒DNA抽提,限制性内切酶酶切,目的DNA片段分离、纯化,载体构建,重组DNA转化等主要步骤