你好,你克隆过未知的基因吧?我也要克隆一个未知基因.我有以下疑问:1,我克隆鱼的一个未知基因.我该找多少生物的该基因来比对找保守区.因为鱼类的比较少,就两种鱼NCBI里面有Sequence,还是

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/04/28 03:02:03
你好,你克隆过未知的基因吧?我也要克隆一个未知基因.我有以下疑问:1,我克隆鱼的一个未知基因.我该找多少生物的该基因来比对找保守区.因为鱼类的比较少,就两种鱼NCBI里面有Sequence,还是

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你好,你克隆过未知的基因吧?我也要克隆一个未知基因.我有以下疑问:1,我克隆鱼的一个未知基因.我该找多少生物的该基因来比对找保守区.因为鱼类的比较少,就两种鱼NCBI里面有Sequence,还是预测的,我不得不找人类,小鼠等哺乳动物的该基因来补上.同源性还是有80%的.可以吧?2,简并引物设计5对够不够?3.从开始到拿到基因全长抓紧时间的话要多久?谢谢解答,谢谢哦.

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1、在Genbank中找其他相关物种的序列是可以的,80%也够用,只要找到合适的氨基酸保守区域就行.
2、简并引物设计5对也够,先试试,不够再找其他区段设计,其实“每对简并引物”中含有的真实引物成百上千,计算一下,尽量不要超过1000.
3、拿到全长基因需要多长时间不太好确定,一切顺利,拿到全长一个月足够,这里有运气的成分,如果一旦有条带,一定要马上测序,不要寄希望下次再扩增,有时可能就扩不到了.还有就是条件允许,建议同时克隆2-3个基因,因为如果用RACE,有些基因5‘端比较难扩.

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