染色质免疫共沉淀ChIP 植物10天左右的幼苗做ChIP 实验,请问样品最少要多少g呢?最近一次取材只有0.5g,

染色质免疫共沉淀ChIP 植物10天左右的幼苗做ChIP 实验,请问样品最少要多少g呢?最近一次取材只有0.5g,
染色质免疫共沉淀ChIP
植物10天左右的幼苗做ChIP 实验,请问样品最少要多少g呢?最近一次取材只有0.5g,

染色质免疫共沉淀ChIP 植物10天左右的幼苗做ChIP 实验,请问样品最少要多少g呢?最近一次取材只有0.5g,
应该可以做了的,我做动物的组织,一次实验的用量才几十mg,有看到论坛里有人说最少10-20mg就可以做了呢

染色质免疫沉淀（ChIP）实验指南及技术总结ChIP是一项比较流行的研究转录因子（transcriptionfactor，TF）与启动子（promoter）相互结合的实验技术。由于ChIP采用甲醛固定活细胞或者组织的方法，所以能比较真实的反映细胞内TF与Promoter的结合情况。当用甲醛处理时，相互靠近的蛋白与蛋白，蛋白与核酸（DNA或RNA）之间会产生共价键。细胞内，当TF与Promoter相...

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染色质免疫沉淀（ChIP）实验指南及技术总结ChIP是一项比较流行的研究转录因子（transcriptionfactor，TF）与启动子（promoter）相互结合的实验技术。由于ChIP采用甲醛固定活细胞或者组织的方法，所以能比较真实的反映细胞内TF与Promoter的结合情况。当用甲醛处理时，相互靠近的蛋白与蛋白，蛋白与核酸（DNA或RNA）之间会产生共价键。细胞内，当TF与Promoter相互结合（生物意义上的结合）时，它们必然靠的比较近，或者契合在一起，这个时候用甲醛处理，能使它们之间产生共价键染色质免疫沉淀分析（ChiP）是基于体内分析发展起来的方法，它的基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质－DNA复合物，并通过超声或酶处理将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过抗原抗体的特异性识别反应沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。它能真实、完整地反映结合在DNA序列上的调控蛋白，是目前确定与特定蛋白结合的基因组区域或确定与特定基因组区域结合的蛋白质的一种很好的方法。CHIP不仅可以检测体内反式因子与DNA的动态作用，还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。而且，CHIP与其他方法的结合，扩大了其应用范围：CHIP与基因芯片相结合建立的CHIP－on－chip方法已广泛用于特定反式因子靶基因的高通量筛鸦CHIP与体内足迹法相结合，用于寻找反式因子的体内结合位点；RNA－CHIP用于研究RNA在基因表达调控中的作用。一般ChIP的流程是：甲醛处理细胞－－－收集细胞，超声破碎－－－加入目的蛋白的抗体，与靶蛋白－DNA复合物相互结合－－－加入ProteinA，结合抗体－靶蛋白－DNA复合物，并沉淀－－－对沉淀下来的复合物进行清洗，除去一些非特异性结合－－－洗脱，得到富集的靶蛋白－DNA复合物－－－解交联，纯化富集的DNA－片断－－－PCR分析。在PCR分析这一块，比较传统的做法是半定量－PCR。但是现在随着荧光定量PCR的普及，大家也越来越倾向于Q－PCR了。此外还有一些由ChIP衍生出来的方法。例如RIP（其实就是用ChIP的方法研究细胞内蛋白与RNA的相互结合，具体方法和ChIP差不多，只是实验过程中要注意防止RNase，最后分析的时候需要先将RNA逆转录成为cDNA）；还有ChIP－chip（其实就是ChIP富集得到的DNA－片段，拿去做芯片分析，做法在ChIP的基础上有所改变，不同的公司有不同的做法，要根据公司的要求来准备样品）。第一天：（一）、细胞的甲醛交联与超声破碎。1、取出1平皿细胞（10cm平皿），加入243y酰臁9常罚ゼ兹沟眉兹┑闹张ǘ任保ィㄅ嘌灿校梗恚欤＃病ⅲ常飞闶隙确跤保埃恚椋睢＃场⒅罩菇涣杭痈拾彼嶂林张ǘ任埃保玻担汀＃矗担啊5酰臁。玻担透拾彼嵊谄矫笾小；煸群螅谑椅孪路胖茫担恚椋罴纯伞＃础⑽∨嘌帽涞模校拢忧逑聪赴泊巍＃怠⑾赴蔚妒占赴冢保担恚炖胄墓苤校ǎ校拢右来挝担恚欤常恚旌停常恚欤Tだ浜螅玻埃埃埃颍穑怼m担恚椋钍占赴＃丁⒌谷ド锨濉0凑障赴浚尤耄樱模印173蹋螅椋蟆。拢酰妫妫澹颉J沟孟赴张ǘ任浚玻埃埃酰旌病粒保埃陡鱿赴U庋浚保埃埃酰烊芤汉薄粒保埃陡鱿赴T偌尤氲鞍酌敢种萍粮春衔铩＜偕瑁停茫疲烦ぢ逦怠粒保埃陡鱿赴1敬蜗赴さ迷嘉福埃ァ＜次础粒保埃陡鱿赴R虼嗣抗芗尤耄矗埃埃酰臁。樱模印。蹋螅椋蟆。拢酰妫妫澹颉＝补芑煸谝黄穑嘞氯模荆?

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